论著
Capto Core 400和Sepharose 6FF在Sabin株脊髓灰质炎病毒纯化工艺中的应用比较
国际生物制品学杂志, 2020,43(6) : 292-295. DOI: 10.3760/cma.j.cn311962-20200507-00049
摘要
目的

分别用新型复合型层析介质Capto Core 400和传统介质Sepharose 6FF纯化Sabin株脊髓灰质炎病毒(Sabin strain poliovirus,sPV)去除宿主细胞蛋白(hostcell protein,HCP)和DNA,并且比较纯化结果及工艺参数。

方法

用Capto Core 400与Sepharose 6FF纯化Vero细胞培养的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型sPV浓缩液。分别检测纯化后sPV的D抗原含量、HCP残留量和DNA残留量,计算D抗原回收率、HCP和DNA去除率,并用t检验分析差异。

结果

Capto Core 400与Sepharose 6FF纯化Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型sPV的D抗原回收率差异均无统计学意义(t值分别为1.09、1.08、1.02,P值均>0.05),但前者的Vero细胞HCP(t值分别为3.15、3.23、3.54)和DNA去除率均高于后者(t值分别为3.41、3.25、3.62),且差异有统计学意义(P值均<0.05)。Capto Core 400与Sepharose 6FF的介质使用体积比值为0.05,上样后纯化时间比值为0.04,工作缓冲液使用量比值为0.25,工艺线性流速比值为10,每升介质上样量比值为20,最大耐压力比值为2。

结论

对比Sepharose 6FF,Capto Core 400可以更有效地去除Vero细胞HCP与DNA,各个工艺参数得到了优化,提高了sPV层析纯化的工作效率,并节约了时间和成本。

引用本文: 赵硕, 彭博, 孙浩, 等.  Capto Core 400和Sepharose 6FF在Sabin株脊髓灰质炎病毒纯化工艺中的应用比较 [J] . 国际生物制品学杂志, 2020, 43(6) : 292-295. DOI: 10.3760/cma.j.cn311962-20200507-00049.
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Capto Core 400是新型核心微球及复合吸附模式层析介质,介质表面具有5 μm厚的凝胶层,可以阻止大分子(相对分子质量>400 000)经壳层孔径进入核心。微球内部为带有辛胺基配基的正电荷分子,可以吸附进入微球内相对分子质量小于400 000的宿主细胞蛋白(host cell protein,HCP)以及DNA[1]。Sabin株脊髓灰质炎病毒(Sabin strain poliovirus,sPV)颗粒大小为30 nm,相对分子质量大于400 000,不会进入Capto Core 400介质核心而从介质外水流出,从而达到分离目的[2]。Capto Core 400具有疏水和带正电荷的配基将每个微球核心功能化,复合模式配基能在较宽的pH与盐浓度范围下,与进入核心大多数杂质强有力结合[3]

 
 
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