利用Caco-2细胞建立体外肠黏膜屏障模型，系统评价并初步探讨其在炎症损伤后黏膜通透性改变中的应用。
体外培养Caco-2细胞，接种于Transwell板上，每日观察细胞形态；自培养第5天起，隔日测细胞膜的跨上皮电阻(transepithelial electrical resistance，TEER)；对于TEER值达标准的孔测定荧光黄透过率，进行透射电镜的完整性验证。应用培养21 d的Caco-2细胞屏障，加入不同浓度(0、50、100、200 nmol/L)的血小板活化因子(platelet-activating factor，PAF)孵育24 h，光镜、电镜观察形态学改变，检测TEER和荧光黄透过率，应用间接免疫荧光和Western blot观察ZO-1蛋白的分布及表达。
Caco-2细胞单层TEER从第5～15天逐渐增加，在第15天已经达到600 Ω·cm2，平台期保持至第21天；在此期间，细胞形成紧密单层，电镜下细胞呈高分化，细胞间形成紧密连接，绒毛整齐，极性形成；荧光黄透过量极低，体外肠上皮细胞屏障形成。加入PAF后，以100 nmol/L对黏膜屏障通透性影响最大：电镜下见紧密连接结构破坏、断裂，细胞表面微绒毛脱落、稀疏；免疫荧光可见紧密连接的标志蛋白ZO-1荧光信号减弱，ZO-1环断裂，胞浆内可见阳性染色，提示其向膜下转移。此时，TEER值下降，荧光黄透过量明显增加，与对照组比较差异有统计学意义(P< 0.01)，与形态学改变规律一致；ZO-1蛋白表达亦降至最低，与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01)。
经形态学及细胞通透性验证，培养2～3周的Caco-2细胞可形成肠屏障模型，用于体外肠黏膜屏障的研究；PAF影响紧密连接相关蛋白的表达，破坏紧密连接结构，从而影响肠黏膜屏障通透性。
版权归中华医学会所有。
未经授权，不得转载、摘编本刊文章，不得使用本刊的版式设计。
除非特别声明，本刊刊出的所有文章不代表中华医学会和本刊编委会的观点。
肠黏膜屏障在防御外来抗原物质对机体的侵袭，保持机体内环境稳定，维持机体正常生命活动等方面具有重要作用[1]。异常的肠黏膜通透性增高在多种疾病的发生、发展中均扮演着重要角色。为体外研究肠黏膜通透性，建立可靠的肠黏膜屏障模型是前提和关键。Caco-2细胞是一种人克隆结肠腺癌细胞，经培养可分化形成结构和功能类似于有极性的人肠道上皮细胞[2]，被广泛应用于口服药物通过小肠黏膜吸收、代谢、转运的研究。近年来，该模型应用于研究肠道上皮屏障的细胞骨架、连接结构和通透性以及信号传导通路及细胞因子等，亦取得了令人瞩目的进展。现报道Caco-2细胞单层体外肠屏障模型的建立和评价方法，并初步探讨其对紧密连接相关蛋白的影响，为后续的屏障通透性研究奠定实验基础。
