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小鼠H2B-GFP真核表达载体的构建与鉴定
国际遗传学杂志, 2006,29(01)
: 15-19. DOI: 10.3760/cma.j.issn.1673-4386.2006.01.006
摘要
目的 构建小鼠H2B-绿色荧光蛋白(GFP)真核表达载体,为动态观察小鼠细胞中染色体的形态变化,从而进一步研究小鼠耐药细胞中双微体(DMs)的形成机制提供有效的分子工具.方法利用RT-PCR的方法获得小鼠H2B cDNA,以羧基端插入pcDNA3.1/CT-GFP-TOPO载体上,构建H2B-GFP真核表达载体,经菌液PCR、酶切及DNA测序鉴定插入片段大小、方向及序列的正确性,提取质粒转染小鼠胚胎成纤维细胞系NIH3T3进行鉴定.结果经菌液PCR、酶切和测序,证明小鼠H2B-GFP真核表达载体含有大小、方向及序列正确的H2B cDNA片段,转染NIH3T3后在细胞核中表达.结论成功构建了同时携带有G418筛选位点及多酶切位点的小鼠H2B-GFP真核表达载体,为其在小鼠体外培养细胞中的表达奠定了基础。
引用本文:
孙文靖,
马琳琳,
韩菲菲,
等.
小鼠H2B-GFP真核表达载体的构建与鉴定
[J]
. 国际遗传学杂志,2006,29(
01
): 15-19. DOI: 10.3760/cma.j.issn.1673-4386.2006.01.006
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