观察诊断布鲁菌病（简称布病）的6种血清学方法，探讨其临床意义。
选取2018年1-6月在黑龙江省农垦总局总医院就诊的160例布病患者作为病例组，健康体检人员235例作为对照组。采用虎红平板凝集试验（RBPT）、荧光偏振试验（FPA）、间接酶联免疫吸附试验（iELISA）、半胱氨酸凝集试验、试管凝集试验（SAT）、抗人球蛋白试验（Coomb′s）6种方法进行布病血清学检测，比较4种初筛方法中RBPT与FPA、iELISA、半胱氨酸凝集试验和2种确诊方法中SAT与Coomb′s的一致性，并分析方法的灵敏度、特异度、漏诊率和误诊率。
初筛方法中，RBPT与FPA、iELISA的一致性为比较符合（Kappa = 0.872、0.784），与半胱氨酸凝集试验的一致性为一般符合（Kappa = 0.543）。确诊方法中，SAT与Coomb′s的一致性为比较符合（Kappa = 0.861）。FPA、iELISA、半胱氨酸凝集试验、Coomb′s 4种方法的灵敏度分别为91.03%、75.00%、56.41%、80.14%；特异度分别为95.81%、100.00%、98.74%、100.00%；漏诊率分别为8.97%、25.00%、43.59%、19.86%；误诊率分别为4.19%、0、1.26%、0。
FPA、iELISA灵敏度较好、特异度较高，适宜临床推广。建议多种血清学方法联合检测，从而降低布病误诊、漏诊概率，提高布病的诊断水平。
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布鲁菌病（简称布病）是由布鲁菌引起的一种人畜共患病。病原菌由患病的牲畜（或其他传染源）通过消化道、呼吸道等传播途径传染给人，引起全身网状内皮系统增生、菌血症、毒血症等病理反应，造成免疫系统、骨关节系统、循环系统、神经系统等多系统损害而产生相应的临床表现。部分患者以单一症状或并发症为突出的临床表现，易出现临床误诊误治[1]。且布病病程长、反复发作，对患者劳动能力影响很大。因此，找到准确快速诊断布病的方法尤为重要。目前，用于布病的主要诊断技术有细菌学检测、血清学检测[虎红平板凝集试验（RBPT）、平板凝集试验（RPST）、试管凝集试验（SAT）、补体结合试验（CFT）、胶体金免疫层析法（GICA）、抗人球蛋白试验（Coomb′s或AGT）、间接酶联免疫吸附试验（iELISA）、核酸检测（PCR）等][2]。我国布病诊疗指南中，血清学检测仍是首选方法。本研究采用RBPT、荧光偏振试验（FPA）、iELISA、半胱氨酸凝集试验、SAT、Coomb′s 6种方法对布病患者及健康体检者同时进行检测，并对结果进行对比分析，以期为布病血清学检测结果的可靠性提供依据。
选择2018年1-6月在黑龙江省农垦总局总医院感染科确诊及疑似确诊的布病患者160例作为病例组，选择同期健康体检者235例作为对照组。所有调查对象均签署知情同意书。
采集调查对象空腹静脉血5 ml于促凝管中，离心后分离血清。采用RBPT、FPA、iELISA、半胱氨酸凝集试验、SAT、Coomb′s 6种方法检测布鲁菌抗体。FPA、iELISA按试剂盒说明书操作；RBPT、半胱氨酸凝集试验、SAT、Coomb′s参照《实用临床布鲁杆菌病》进行。布病诊断参照《布鲁氏菌病诊断标准》（WS 269-2007）。
FPA、iELISA试剂盒购自哈尔滨平河生物技术有限公司与黑龙江省平河生物技术研究所；虎红平板凝集抗原、试管凝集抗原及抗球蛋白血清由中国疾病预防控制中心传染病预防控制所提供；L-半胱氨酸购自天津市致远化学试剂有限公司。荧光偏振仪购自德国FLUPO公司；酶标仪（KHB ST 360）购自上海科华实验系统有限公司。
FPA、iELISA参照试剂盒说明书进行结果判定。RBPT、半胱氨酸凝集试验、SAT、Coomb′s参照《实用临床布鲁杆菌病》进行结果判定。FPA：检测值> 93 mP（毫偏）判定为阳性，72~93 mP判定为弱阳性，< 72 mP判定为阴性。iELISA：标本与阳性对照吸光度（A）比值≥0.24判定为阳性，< 0.24判定为阴性。RBPT：平板上出现肉眼可见的凝集反应，判定为阳性；液体均匀浑浊，未见到凝集反应，判定为阴性。半胱氨酸凝集试验：以比浊管为标准判定结果，滴度为1∶20++及以上，出现肉眼可见的凝集，判定为阳性；滴度为1∶20，无肉眼可见的凝集，判定为阴性。SAT：以比浊管为标准判定结果，滴度为1∶100++及以上，出现肉眼可见的凝集，判定为阳性；滴度为1∶50++及以下判定为阴性。Coomb′s：凝集程度等同于试管凝集试验，滴度为1∶400++及以上判定为阳性；1∶200++及以下判定为阴性。
采用SPSS 17.0统计软件进行数据处理。组间年龄比较采用t检验，性别比例比较采用χ2检验，P < 0.05为差异有统计学意义。我国国家标准中指定的布病实验室初筛方法包括RBPT和iELISA，实验室确诊方法包括SAT、Coomb′s、CFT和血培养。故初筛方法中，以RBPT为金标准，与其他3种初筛方法（FPA、iELISA、半胱氨酸凝集试验）进行一致性比较；确诊方法中，以SAT为金标准，与Coomb′s进行一致性比较，计算一致性系数（Kappa值），Kappa≥0.75，方法一致性判定为比较符合；0.40~< 0.75，方法一致性判定为一般符合；< 0.40，方法一致性判定为较差。同时比较方法的灵敏度、特异度、漏诊率和误诊率，灵敏度=真阳性/（真阳性+假阴性）× 100%，特异度=真阴性/（假阳性+真阴性）× 100%，漏诊率=假阴性/（真阳性+假阴性）× 100%，误诊率=假阳性/（假阳性+真阴性）× 100%。
病例组160例，其中男性134例、女性26例；平均年龄为42岁，范围为1~85岁。对照组235例，其中男性175例、女性60例；平均年龄为44岁，范围为2~83岁。两组性别比例、年龄比较差异无统计学意义（P均> 0.05）。
RBPT与FPA、iELISA的一致性为比较符合（Kappa = 0.872、0.784），与半胱氨酸凝集试验的一致性为一般符合（Kappa = 0.543）。FPA的灵敏度（91.03%）高于iELISA（75.00%）及半胱氨酸凝集试验（56.41%），漏诊率（8.97%）低于iELISA（25.00%）及半胱氨酸凝集试验（43.59%）；iELISA的特异度（100.00%）高于FPA（95.81%）及半胱氨酸凝集试验（98.74%），误诊率（0）低于FPA（4.19%）及半胱氨酸凝集试验（1.26%）。见表1。
布鲁菌病4种血清学初筛方法的比较（n = 395）
布鲁菌病4种血清学初筛方法的比较（n = 395）
| 试验方法 | RBPT | 灵敏度（%） | 特异度（%） | 漏诊率（%） | 误诊率（%） | ||
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| + | - | ||||||
| FPA | + | 142 | 10 | 91.03 | 95.81 | 8.97 | 4.19 |
| - | 14 | 229 | |||||
| iELISA | + | 117 | 0 | 75.00 | 100.00 | 25.00 | 0.00 |
| - | 39 | 239 | |||||
| 半胱氨酸凝集试验 | + | 88 | 13 | 56.41 | 98.74 | 43.59 | 1.26 |
| - | 68 | 226 | |||||
注：RBPT为虎红平板凝集试验；FPA为荧光偏振试验；iELISA为间接酶联免疫吸附试验
SAT与Coomb′s的一致性为比较符合（Kappa = 0.861）。Coomb′s的灵敏度为80.14%，特异度为100.00%，漏诊率为19.86%，误诊率为0，见表2。
布鲁菌病2种血清学确诊方法的比较（n = 395）
布鲁菌病2种血清学确诊方法的比较（n = 395）
| 试验方法 | SAT | 灵敏度（%） | 特异度（%） | 漏诊率（%） | 误诊率（%） | ||
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| + | - | ||||||
| Coomb′s | + | 113 | 0 | 80.14 | 100.00 | 19.86 | 0.00 |
| - | 28 | 254 | |||||
注：SAT为试管凝集试验；Coomb′s为抗人球蛋白试验
当前，布病已有多种血清学检测技术，但仍然缺乏一种特异性高、敏感性好、检测时间短、操作简单的血清学检测方法[3]。RBPT、SAT、iELISA是我国医疗机构、疾病预防控制中心以及布病防治单位最常用的血清学检测方法[4]。依据2019年1月发布的《布鲁氏菌病诊断》（WS 269-2019）标准，SAT和Coomb′s被列入实验室确诊试验，其优点是特异度较高、误诊率较低，缺点是操作复杂，报告结果时间长，且判定结果需有经验的实验室人员。本研究中，SAT和Coomb′s 2种血清学确诊方法的Kappa≥0.75，2种检测方法一致性比较符合，Coomb′s的灵敏度为80.14%，特异度为100.00%，漏诊率为19.86%，误诊率为0。根据《布鲁氏菌病诊断》（WS 269-2019），ELISA从2019年开始被正式列入实验室初筛检查项目，其优点是操作简单，2 h内可报告多人次结果。RBPT是传统的血清学检测方法，敏感性好，适用于大规模人群的筛查，但其误诊率相对较高。FPA和半胱氨酸凝集试验，目前未被列入布病诊断标准，但FPA是世界动物卫生组织（OIE）标准规定的、国际贸易中指定的布病初筛检测方法之一，FPA检测需使用荧光偏振仪，排除了传统方法中人为因素干扰的缺点。半胱氨酸凝集试验是传统的布鲁菌检测方法之一，主要检测IgG抗体，通常用于慢性期患者，可用来鉴别是人工免疫还是自然感染。本研究中，RBPT与FPA、iELISA的Kappa≥0.75，与半胱氨酸凝集试验的Kappa≥0.40~< 0.75，表明RBPT与FPA、iELISA比较符合，与半胱氨酸凝集试验一般符合。FPA的灵敏度高于iELISA及半胱氨酸凝集试验，漏诊率低于iELISA及半胱氨酸凝集试验；iELISA的特异度高于FPA及半胱氨酸凝集试验，误诊率低于FPA及半胱氨酸凝集试验。初筛方法中，FPA的敏感度最好，iELISA的特异度最高、误诊率最低。
基于布鲁菌的初筛和确诊方法的优缺点，建议对于大规模人群应先选用RBPT、iELISA或FPA进行检测，其阳性标本再用SAT或Coomb′s进一步检测，辅助临床医生用于布病的诊断、治疗和判断其疗效及预后。还应加强医生和易感人群对布病的认知，及早发现及确诊布病，有利于患者的治疗和早期康复[5]。FPA、iELISA灵敏度较好、特异度较高，适宜临床推广。多种血清学方法联合检测会降低布病误诊、漏诊率，从而提高布病的诊断水平和治愈率。
所有作者均声明不存在利益冲突
