建立基于多重PCR技术的肠球菌万古霉素高水平耐药基因vanA、vanB、vanD和vanM的快速分型检测方法。
通过分析可介导肠球菌万古霉素高度耐药的D-丙氨酸∶D-乳酸(D-Ala∶D-Lac)连接酶基因序列差异，设计可同时检测肠球菌万古霉素高水平耐药基因vanA、vanB、vanD和vanM的多重PCR分型检测方法，以含vanA、vanB、vanD和vanM基因的重组质粒为阳性对照，以临床常见病原菌DNA为阴性对照，评价其敏感度及特异度。采用新建方法检测50株万古霉素耐药临床分离株，50株万古霉素耐药肠球菌(VRE)临床株于2006年1月至2014年12月分离自上海地区9家医院，并与常规PCR及测序方法比较。
vanA、vanB、vanD和vanM基因核苷酸序列一致率为60.8%～71.3%，根据序列差异建立的分型方法可对不同基因型阳性对照样品进行准确分型。所有阴性对照样品均未出现假阳性。检测50株临床分离VRE，18株为vanA型，32株为vanM型，与常规PCR及测序方法比较，敏感度及特异性度均为100.0%。检测下限2×10拷贝/PCR反应，检测可在3.5 h内完成。
建立了一种基于多重PCR技术的VRE万古霉素高水平耐药基因快速分型方法，可用于VRE菌株的分子流行病学研究及检测。
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万古霉素耐药肠球菌(vancomycin-resistant enterococcus, VRE)于1988年在欧洲地区首次报道，此后逐渐在全球广泛传播，现已成为危害人类健康的重要耐药病原菌[1,2]。已知可介导肠球菌对万古霉素高度耐药的基因包括vanA、vanB、vanD和vanM四型，编码蛋白均属D-丙氨酸：D-乳酸(D-Ala∶D-Lac)连接酶[2,3]。流行病学研究显示，vanA、vanB型在临床分离肠球菌中检出率高，危害大，vanD型检出率较低[2]。vanM型2006年在上海地区首次发现，后续监测数据显示此型VRE已在上海地区多家医院传播[4,5]，新加坡也有报道[6]，是否存在其他国家与地区的传播值得关注。由于vnaM型VRE的D-Ala：D-Lac连接酶与其他各型的氨基酸序列一致性为66.3%～79.9%，以往报道的特异性分型方法常无法准确对vanM型VRE进行检测、分型[4]。目前该型检测均采用PCR扩增联合测序，耗时长、费用高，不利广泛开展[4,6]。本研究通过对vanA、vanB、vanD和vanM基因进行比对、分析，建立了可同时检测上述4型基因的快速分型方法。
