论著
羔羊胃药物生物活性成分研究
中华消化杂志, 2021,41(Z1) : 47-53. DOI: 10.3760/cma.j.cn311367-20210714-00381
摘要
目的

研究羔羊胃维生素B12胶囊原料药的药效物质基础。

方法

用0.9%氯化钠溶液提取,通过饱和硫酸铵沉淀,采用二乙基氨乙基纤维素52和高压液相色谱(HPLC)方法分离、纯化凝乳酶和胃蛋白酶。用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和液相色谱-串联质谱测定相对分子质量。用HPLC分析原料药的氨基酸组成和抗氧化活性。依次用水、磷酸盐缓冲液和碳酸氢钠完全提取原料药,并进行体外1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)和2,2′-联氮-双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐自由基消除活性测定。利用热水提法提取原料药中的糖蛋白,测定其对青春双歧杆菌、德氏乳杆菌保加利亚亚种、粪肠球菌的促生长活性,分别用HPLC和气相色谱-质谱方法分析其氨基酸和单糖组成。

结果

纯化得到2种不同离子强度的凝乳酶F6-2、F7-2和胃蛋白酶F7-1的酶活力分别为27 557.10、17 532.60和17 728.15 U/g;SDS-PAGE分析显示3种酶的相对分子质量相似,为35 000~40 000。原料中含有16种氨基酸,其中疏水性氨基酸占总氨基酸含量的33.03%。当样品浓度为5 g/L时,3种提取物的ABTS自由基清除活力分别为(37.80±0.45)%、(23.20±0.78)%、(62.80±0.74)%; DPPH自由基清除活力分别为(57.87±0.55)%、(5.03±0.25)%和(26.67±3.10)%。糖蛋白提取物对青春双歧杆菌、德氏乳杆菌保加利亚亚种、粪肠球菌均有促生长作用,其中对德氏乳杆菌保加利亚亚种和粪肠球菌的促进作用差异均有统计学意义(P均<0.05)。糖蛋白的蛋白质链由15种氨基酸组成,多糖链由葡萄糖和乳糖2种单糖组成。

结论

利用多种色谱方法从羔羊胃原料药中分离、分析到至少2种凝乳酶和1种胃蛋白酶成分;原料药富含抗氧化活性成分;羔羊胃中糖蛋白成分具有体外促益生菌生长活性。

引用本文: 阿米娜·艾尔肯, 赵新民, 高峰, 等.  羔羊胃药物生物活性成分研究 [J] . 中华消化杂志, 2021, 41(Z1) : 47-53. DOI: 10.3760/cma.j.cn311367-20210714-00381.
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羔羊胃提取物是以羔羊第四胃为原料提取的生物活性物质,使用该提取物制成的药物用于治疗急性胃炎、小肠炎、结肠炎等,较早出现的药物有苏联等制备的胃肠道消炎药Abomin[1],法国利奥山都尔研究所研制的Gastropylore原料药和日本日研化学制备的消化酶类的原料药[2,3]。20世纪80年代初期,乌鲁木齐生化制药厂与南京药学院等协作利用天山绵羔羊第四胃提取黏膜总提物并研制了复方制剂,经新疆医学院第一、二附属医院等7家单位的Ⅲ期临床试验验证,该复方制剂对各种类型慢性胃炎、胃大部切除术所致的上腹部不适、腹胀、食欲不振、低酸症、无酸症的有效率为83%,特别对婴幼儿溢奶(漾奶)、呕吐、腹泻等的有效率达96.5%[4,5]。慢性萎缩性胃炎主要是以胃腺体萎缩、黏膜变薄、黏膜肌层增厚,以及伴有肠化生、不典型增生等为病理特点。在Correa模型中,肠化生是肠型胃癌从慢性萎缩性胃炎演变到异型增生至胃癌环节中的关键步骤与阶段[6]。因此,采取一定的治疗方法和药物逆转慢性萎缩性胃炎和肠化生,对阻断胃癌前病变的发生和发展具有非常重要的意义。羔羊胃提取物维B12胶囊Ⅳ期临床试验结果和治疗前后组织病理学评价结果证实,该药物能让胃黏膜细胞生长、增生,减轻萎缩性胃炎的黏膜萎缩和逆转肠化生[7],该结果改变了消化科学领域药物不能逆转肠化生的观念。然而,羔羊胃提取物复方制剂发挥药效作用的生物化学物质基础和机制尚不明确。早期研究发现羔羊胃黏膜中含有胃蛋白酶、凝乳酶、黏多糖、胃膜素、双歧因子和多肽类等成分,并且凝乳酶活性是羔羊胃提取物及其产品生产质量标准效价测定的标准[8,9]。在生命体内,生物大分子在维持与调控生命活动中扮演着隐秘而关键的角色,羔羊胃提取物主要由生物大分子组成,生物化学结构往往决定其功能和性质,因此,从分析该类成分的结构入手很必要。本研究利用生物大分子的分析方法对羔羊胃药效物质基础成分进行初探,为解决羔羊胃提取物中生物大分子对生命体的功能影响与调控机制等科学问题奠定研究基础。

 
 
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