比较不同实验条件下SpyTag/SpyCatcher体系共价连接的效率，分析得出优化后的连接条件，为今后相关纳米颗粒疫苗的开发提供实验依据。
用大肠埃希菌表达分别带有SpyTag和SpyCatcher结构的两种蛋白，摸索共价连接的反应时间、温度、缓冲体系和混合比例，采用非还原型凝胶电泳检测共价连接的效率。
反应时间对共价连接的影响有统计学意义(F＝22.028，P<0.05)，带有SpyTag和SpyCatcher结构的两种蛋白质可形成稳定的共价键，6 h后连接效率约为50%，偶联蛋白在25 ℃稳定存在至少72 h。反应温度和缓冲体系对共价连接的影响没有统计学意义。SpyTag和SpyCatcher结构蛋白比例为物质的量比1.0∶2.0混合。
SpyTag/SpyCatcher共价连接体系的关键工艺参数为反应时间，且该体系能适用于多种温度和缓冲条件。
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SpyTag/SpyCatcher体系是近些年发展起来的一种快速稳定的不可逆肽-蛋白质连接方法，源于CnaB2结构域，基于化脓性链球菌纤黏连蛋白FbaB分离得到[1]。CnaB2含一个具有特殊稳定性的肽键，将其裂解成肽和蛋白片段后进行合理的修饰，可以得到SpyTag(含13个氨基酸残基)和SpyCatcher(含138个氨基酸残基)两个部分。SpyTag中的天冬氨酸能和SpyCatcher上的赖氨酸在与赖氨酸相邻的谷氨酸催化下，自发反应生成异肽共价键，即使在pH2的缓冲体系或100 ℃时仍保持折叠[2,3]。SpyTag/SpyCatcher体系广泛应用于多项基础研究和应用科学中，如通过该体系结合能显著增强免疫应答的蛋白质，诱导针对纳米颗粒疫苗中弱免疫原性表位的高效抗体应答[4,5,6]；提高多酶复合体系中酶级联的效率，同时保持甚至提高生物催化剂的稳定性和可重用性[7,8]；表征蛋白质-RNA相互作用，作为紫外交联免疫沉淀的替代方法[9]；将化学合成的电压敏感染料靶向于特定细胞，进行活体细胞电压的动态光学测量[10]；修饰蛋白水凝胶[11]等。
