探讨miR-200b-3p通过血管内皮生长因子A(VEGFA)调控胰腺癌细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡的分子机制。
采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测胰腺癌组织和细胞中miR-200b-3p表达水平；胰腺癌细胞PANC-1分为NC组、miR-200b-3p mimic组、si-VEGFA组及si-VEGFA＋miR-200b-3p inhibitor组。CCK-8和Transwell检测胰腺癌PANC-1细胞增殖活力以及细胞迁移和侵袭能力；Annexin V-FITC/PI双染细胞凋亡实验检测PANC-1细胞凋亡；Western blotting和双荧光素酶报告基因验证miR-200b-3p与VEGFA的靶向关系。
miR-200b-3p在胰腺癌组织和细胞中低表达。PANC-1细胞过表达miR-200b-3p 48 h后，NC组和miR-200b-3p mimic组细胞增殖活性分别为1.250±0.028、0.983±0.044；迁移细胞数分别为402.700±21.530、158.000±17.620，侵袭细胞数分别为478.300±31.050、170.000±32.470，细胞凋亡百分比为(5.280±0.352)%、(7.430±0.393)%；miR-200b-3p mimic组细胞增殖活性、迁移和侵袭能力均显著低于NC组(t＝5.060，P＝0.007；t＝8.796，P＝0.001；t＝6.863，P＝0.002)，细胞凋亡百分比显著高于NC组(t＝4.076，P＝0.015)。VEGFA-WT单独转染细胞荧光强度为1.000±0.027，显著高于VEGFA-WT＋miR-200b-3p mimic共转染细胞(0.632±0.048；t＝6.637，P＝0.003)。VEGFA-MUT单独转染细胞荧光强度为1.000±0.049，与VEGFA-MUT＋miR-200b-3p mimic共转染细胞差异无统计学意义(0.868±0.047；t＝1.944，P＝0.124)。PANC-1细胞过表达miR-200b-3p 48 h后，NC组和miR-200b-3p mimic组中VEGFA相对表达量分别为1.000±0.058、0.762±0.020，miR-200b-3p mimic组显著低于NC组(t＝3.908，P＝0.017)。PANC-1细胞转染si-VEGFA或同时转染si-VEGFA＋miR-200b-3p inhibitor 48 h后，NC组、si-VEGFA组及si-VEGFA＋miR-200b-3p inhibitor组PANC-1细胞增殖活性分别为1.300±0.058、0.943±0.047、1.143±0.023，迁移细胞数分别为446.000±17.350、206.300±19.360、428.300±30.330，侵袭细胞数分别为510.300±24.550、175.700±24.290、473.700±35.530，组间差异具有统计学意义(F＝15.830，P＝0.004；F＝33.530，P＝0.001；F＝38.860，P<0.001)。si-VEGFA组细胞增殖活性、迁移和侵袭能力均显著低于NC组(P＝0.003，P<0.001，P<0.001)，而si-VEGFA＋miR-200b-3p inhibitor组细胞增殖活性、迁移和侵袭能力与NC组差异无统计学意义(P＝0.107，P＝0.854，P＝0.671)。NC组、si-VEGFA组及si-VEGFA＋miR-200b-3p inhibitor组细胞凋亡百分比分别为(3.810±0.577)%、(7.373±0.482)%、(3.650±0.514)%，组间差异具有统计学意义(F＝16.020，P＝0.004)，si-VEGFA组细胞凋亡百分比显著高于NC组(P＝0.007)，而si-VEGFA＋miR-200b-3p inhibitor组与NC组差异无统计学意义(P＝0.975)。
miR-200b-3p通过靶向下调VEGFA表达，进而抑制胰腺癌细胞增殖、侵袭和迁移，并促进细胞凋亡。
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胰腺癌是一种发病率高且预后不良的肿瘤[1]。据报道，胰腺癌患者5年生存率低于30%[2]。因此，探讨调控胰腺癌发展的相关分子机制至关重要。有研究表明，miRNA与肿瘤发生发展相关[3,4,5]。例如，miR-200b-3p在多种肿瘤中扮演抑癌基因的角色，高水平miR-200b-3p可以抑制肿瘤的发生和转移[6,7,8]；在胰腺癌中，miR-200b-3p可以抑制上皮-间质转化的发生，并且调节胰腺癌干细胞自我更新分裂的模式[9,10]。有研究报道，血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth factor A，VEGFA)可以促进膀胱癌、结直肠癌和口腔癌等的发生发展[11,12,13]。本研究拟探讨miR-200b-3p-VEGFA分子轴调控胰腺癌细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡的分子机制。
