观察天冬氨酸β羟化酶(ASPH)在调节细胞自噬中的作用。
向OUMS-29、HEK-293T细胞转染ASPH质粒，Western blot检测转染后细胞p62、微管相关蛋白1轻链3(LC3)-Ⅱ的表达；向OUMS-29细胞共转染ASPH、pEGFP-LC3质粒，荧光显微镜下计算绿色荧光蛋白(GFP)-LC3-Ⅱ点状聚集阳性细胞数占GFP阳性细胞数的比率。沉默HuCCT1、SSP25细胞ASPH基因，Western blot检测细胞p62、LC3-Ⅱ的表达，并用噻唑蓝(MTT)法检测细胞自噬诱导剂雷帕霉素(Rapa)或二甲双胍(Met)对细胞生长速率的影响。
过表达ASPH使OUMS-29、HEK-293T细胞内LC3-Ⅱ表达下降44%(P＝0.002，P＝0.008)，但不改变p62表达量(P＝0.060，P＝0.798)；过表达ASPH使OUMS-29细胞GFP-LC3-Ⅱ点状聚集阳性细胞数占GFP阳性细胞数比率由50.84%降至28.31%(P＝0.002)；ASPH基因沉默使HuCCT1、SSP25细胞内LC3-Ⅱ表达分别上调87%、133%(P＝0.001，P＝0.000)，但不影响p62表达(P＝0.677，P＝0.168)；细胞自噬诱导剂雷帕霉素或二甲双胍掩盖ASPH沉默对HuCCT1、SSP25细胞生长速率的影响。
ASPH通过抑制LC3-Ⅱ生成抑制细胞自噬；ASPH对细胞自噬的调节可能是其参与细胞生长调控的机制之一。
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天冬氨酸β羟化酶(ASPH)属于α酮戊二酸依赖性双加氧酶家族，其高表达见于多种组织来源的肿瘤，而在正常成人组织中不表达或表达量极低[1]。已有研究表明ASPH部分生物学功能。过量表达ASPH使细胞呈现恶性表型，即提高细胞增殖速率、运动能力、迁移力、侵袭力和远处转移能力[2,3,4]。沉默或敲除ASPH基因能够抑制细胞增殖和软琼脂克隆集落形成，并能诱导细胞老化[5]。ASPH的这些生物学特性提示其可作为一种新的潜在的肿瘤治疗靶点。自噬是真核细胞对蛋白质、细胞器等胞质成分溶酶体依赖性降解、再循环的过程，受其影响的细胞活动很广泛，包括细胞供能、毒素清除、细胞器功能维持等[6]。本研究旨在探讨ASPH对细胞自噬的调节作用。
