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周围神经损伤一直是临床常见的难题。我们选取可吸收明胶海绵作为细胞载体搭载脂肪干细胞来源的施旺样细胞进行体外混合培养，探讨其生物相容性，为其进行体内移植修复神经奠定基础[1]。
无特定病原体(SPF)级健康雄性SD大鼠4只，低糖杜尔伯科改良伊格尔(DMEM)培养基(Hyclone)，β-巯基乙醇(2-ME，Sigma公司)，全反式维甲酸(RA，Sigma公司)，腺苷酸环化酶激活剂(Peprotech，US公司)，重组人碱性成纤维细胞生长因子(bFGF，Peprotech，US公司)，重组血小板源性衍生因子(PDGF，Peprotech，US公司)，神经胶质营养因子(Peprotech，US公司)，S-100抗体(Abcam，UK公司)，GFAP抗体(Abcam，UK公司)等。
根据全骨髓细胞培养方法[2]，提取SD大鼠的脂肪干细胞，加入流式抗体CD90、CD29、CD45，孵育后检测。根据根据Jiang等[3]提供的诱导分化方法依次加入诱导因子2-ME，RA、bFGF、PDGF、神经胶质营养因子、腺苷酸环化酶激活剂共培养2周。将诱导细胞加入S100、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)抗体行免疫荧光染色。
可吸收明胶海绵切成小块，浸入0.1 mg/L的多聚赖氨酸过夜，向预处理的海绵上加载施旺样细胞，置细胞培养箱培养，并观察细胞生长黏附等情况。
取密度为5×103/ml的施旺样细胞200 μl，加入置有预处理海绵的96孔板中混合培养，以混合培养细胞为实验组，单纯施旺样细胞为对照组行MTT实验。于第3、5天取出载有细胞的可吸收明胶海绵，通过固定、脱水、干燥、表面喷金后于扫描电镜下观察。
应用SPSS 22.0统计软件分析，计量资料以均值±标准差(Mean±SD)表示，组间比较采用t检验进行分析，以P<0.05为差异有统计学意义。
流式细胞仪检测示CD90、CD29阳性，CD45阴性；诱导分化后，细胞形态极化，呈纺锤形，免疫荧光染色示GFAP、S100阳性。
MTT实验示两组未见明显差异(表1)。扫描电镜示可吸收明胶海绵具有良好的三维结构；细胞可黏附于可吸收海绵表面，状态良好，10 d左右海绵略降解，见少量碎片。
可吸收明胶海绵加载施旺样细胞(实验组)与单纯施旺样细胞(对照组)的MTT实验结果
可吸收明胶海绵加载施旺样细胞(实验组)与单纯施旺样细胞(对照组)的MTT实验结果
| 组别 | 1 d | 2 d | 3 d | 4 d |
|---|---|---|---|---|
| 实验组 | 0.32±0.02 | 0.37±0.02 | 0.39±0.04 | 0.44±0.03 |
| 对照组 | 0.33±0.01 | 0.37±0.03 | 0.40±0.03 | 0.45±0.02 |
| P值 | 0.410 | 0.390 | 0.820 | 0.260 |
| 组别 | 5 d | 6 d | 7 d |
|---|---|---|---|
| 实验组 | 0.49±0.03 | 0.54±0.03 | 0.58±0.02 |
| 对照组 | 0.50±0.02 | 0.55±0.03 | 0.59±0.01 |
| P值 | 0.650 | 0.780 | 0.360 |
注：MTT：噻唑蓝
本次研究通过MTT实验判断可吸收明胶海绵对诱导后的施旺样细胞生长增殖的影响，结果证实可吸收明胶海绵对细胞活力无显著影响；扫描电镜观察发现施旺样细胞可黏附于可吸收明胶海绵上，可伸出突起，呈典型纺锤形，约10 d左右可吸收明胶海绵开始出现降解。本研究结果显示可吸收明胶海绵具有良好的组织相容性，为可吸收明胶海绵作为施旺样细胞的生物载体进行体内移植奠定了一定的基础。
所有作者均声明不存在利益冲突
