目前研究表明，伴有癌基因(N-myc)扩增及高表达是神经母细胞瘤预后不良、临床高危分组的重要指标^[1]。Nemo样激酶(NLK)/遗传(Wnt)信号通路在神经母细胞瘤的发生发展过程中起着重要作用，并调控着N-myc表达^[1]。微小RNA(miRNA，miR)-221在神经母细胞瘤中高表达，并能够通过调控N-myc表达促进神经母细胞瘤细胞增殖^[2]，但是否能够通过调节上游NLK/Wnt信号通路，进而调控下游N-myc表达，最终促进神经母细胞瘤细胞增殖还尚未见报道，因此本研究将对此展开探讨。

应用Lipofectamine™3000将miR-221 mimics、miR-221 NC(阴性对照组)转染到SH-SY5Y细胞，并设立转染试剂为空白对照组，实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测miR-221表达，细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞活力，流式细胞术检测细胞细胞周期，细胞克隆形成实验检测细胞克隆数目，实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)和Western blot检测NLK、Wnt1a、Wnt3a、N-myc蛋白及mRNA表达。

Real-time PCR结果表明miR-221 mimics组miR-221表达量较空白对照组及阴性对照组显著上调(P<0.05)。CCK-8实验结果表明miR-221 mimics组细胞活力较空白对照组及阴性对照组提高(P<0.05)。细胞克隆形成实验结果表明miR-221 mimics组细胞克隆数目均较空白对照组及阴性对照组增加(P<0.05)。流式细胞术实验结果表明miR-221 mimics组细胞周期G1期较空白对照组及阴性对照组缩短(P<0.05)。miR-221 mimics组Wnt1a、Wnt3a、N-myc mRNA及蛋白表达量较空白对照组及阴性对照组上调(P<0.05)，NLK mRNA及蛋白表达量较空白对照组及阴性对照组下调(P<0.05)。

本研究首先采用脂质体转染miR-221 mimics及miR-221 NC，Realtime PCR证实转染成功。接着细胞毒性活性检(CCK-8)及细胞克隆形成实验结果说明miR-221 mimics能显著提高SH-SY5Y细胞活力，促进细胞增殖，与miR-221在其他肿瘤细胞株中的作用效果一致^[2]。流式细胞术实验结果表明miE-221能加速SH-SY5Y细胞从G₁期转入S期，促进细胞快速增殖，说明miR-221的过表达促进SH-SY5Y细胞的恶性转化。最后本研究Realtime PCR及western blot实验结果表明miR-221 mimics能显著下调NLK，上调Wnt1a、Wnt3a、N-myc表达，从而说明miR-221 mimics通过调控NLK/Wnt/N-myc信号通路促进SH-SY5Y神经母细胞瘤细胞增殖。