实验研究
bEnd.3细胞来源外泌体促成骨效应的体外研究
中华实验外科杂志, 2021,38(3) : 507-510. DOI: 10.3760/cma.j.cn421213-20200727-01267
摘要
目的

观察小鼠脑微血管内皮细胞bEnd.3来源的外泌体对骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨效应的影响。

方法

通过超高速离心法提取bEnd.3细胞来源的外泌体(b-Exo),利用透射电子显微镜(TEM)、纳米粒径追踪分析(NTA)和外泌体蛋白标志物蛋白质印迹法(Western blot)实验鉴定所提取的外泌体。与磷酸盐缓冲液(PBS)对照,使用茜素红染色检测其对BMSCs基质矿化,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测成骨分化相关基因Runx2、Osteopontin、Osteocalcin表达的影响。组间比较采用t检验。

结果

TEM下观察到b-Exo具有典型囊泡样结构,NTA显示b-Exo浓度为7.5×1010颗粒/ml,直径为(100.0±7.3) nm。b-Exo可显著增强BMSCs基质矿化,b-Exo组成骨分化相关基因核心结合蛋白因子2(Runx2)、骨桥蛋白(Osteopontin)和骨钙蛋白(Osteocalcin)的表达显著高于对照组(8.28±0.34比3.71±0.40,t=4.974,P<0.01;9.19±1.91比4.09±0.88,t=5.562,P<0.01;10.31±1.67比5.32±0.31,t=5.432,P<0.01),差异均有统计学意义。

结论

bEnd.3细胞来源的外泌体能够促进BMSCs的成骨分化,有望应用于骨再生和骨质疏松症的无细胞治疗。

引用本文: 崔永志, 刘平, 梁涛, 等.  bEnd.3细胞来源外泌体促成骨效应的体外研究 [J] . 中华实验外科杂志, 2021, 38(3) : 507-510. DOI: 10.3760/cma.j.cn421213-20200727-01267.
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外泌体是一种直径为30~100 nm的具有磷脂双分子层结构的细胞外囊泡,其中包含大量核酸、蛋白质和其他生物活性分子,对细胞间信息交流和细胞增殖分化等行为调节起到至关重要的作用[1]。研究结果表明细胞可以通过分泌外泌体进行细胞间信息交流和调节细胞增殖分化等行为[2]。最新研究结果表明,bEnd.3细胞来源的外泌体(bEnd.3 cells derived exosome,b-Exo)通过尾静脉注射后可以大量富集到骨组织,被破骨前体细胞摄取后可以抑制破骨细胞生成,并且减弱破骨细胞骨吸收活性[3]。而过度激活的破骨吸收活性恰恰是导致骨质疏松症的关键因素之一[4]。然而,减弱的骨形成能力同样也在骨质疏松症的发病过程中起重要作用,b-Exo对骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)的成骨活性有无影响尚不明确。本研究通过超高速离心法提取b-Exo,观察其对小鼠BMSCs成骨分化能力的影响,探讨b-Exo对骨代谢的调控机制。

 
 
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