构建乙型肝炎病毒（HBV）C启动子近端肝富集转录因子结合位点突变的重组HBV复制型质粒，以期阐明其在HBx增强HBV复制中的作用。
利用定点突变技术在野生型HBV复制型质粒和HBx表达缺失的HBV复制型质粒基础上构建HBV C启动子近端肝富集转录因子结合位点突变的重组质粒。随后在HBV肝癌细胞复制模型和小鼠复制模型中进行质粒转染，提取细胞和小鼠肝组织的HBV复制中间体进行检测。
在HBV复制型质粒的基础上成功构建HBV C启动子近端肝富集转录因子结合位点突变的HBV复制型质粒。在HBV肝癌复制模型和小鼠复制模型中均发现HBx增强HBV的复制。突变HBV C启动子肝富集转录因子结合位点以后，HBx对于HBV复制增强的作用并未受到显著影响。
HBx增强HBV复制可能不通过肝富集转录因子和与HBV C启动子近端的结合位点而起作用，其他肝富集转录因子结合位点在HBx增强HBV复制中的作用仍需进一步研究。
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乙型肝炎病毒（HBV）是一种部分双链的环状DNA病毒，其长链含有C、S、P、X 4个重叠开放阅读框，其中X区基因最小，约465 bp，编码由154个氨基酸组成的HBV x蛋白（HBV-encoded x protein，HBx）[1]。HBx是一种多功能调节蛋白，一方面，它影响HBV自身的生命周期，另一方面，其可与多种宿主蛋白相互作用，共同调节基因表达、影响宿主蛋白质功能、调控信号转导、细胞周期、细胞凋亡和癌变等生物过程[2]。HBx对HBV转录复制的调控是其影响HBV生命周期的重要手段，但是目前的机制并未完全阐明。既往研究结果证实，含有HBV基因组的复制型质粒转染HepG2细胞后，HBx能增强HBV的转录复制，并且HBx反式激活HBV C启动子区（C promoter，Cp）在增强HBV复制中起着重要作用[3]。然而，多项研究结果证实HBx不是典型的转录激活因子，而是转录协同激活因子，它不能直接结合DNA，而是与各种细胞蛋白、转录因子和转录协同因子结合发挥作用，其对基因转录的调控主要是通过蛋白-蛋白相互作用反式激活相应的启动子和增强子而实现[4]。因此，探索HBx对HBV Cp的反式激活机制对阐明HBx的转录复制调控功能意义重大。HBx可与ATF/CREB、AP-1、C/EBP，核因子- κB，SREBP-1a等多种转录因子相互作用，调节其转录活性[5]。由此推测，HBx与肝细胞中特定转录因子的相互作用可能是其实现反式激活HBV Cp的关键环节。肝富集转录因子是一类在肝脏中高丰度表达且具有基因转录调控作用的转录因子，与HBV转录复制密切相关。肝富集转录因子包括肝细胞核因子（hepatocyte nuclear factor, HNF）1、HNF3、HNF4；维甲酸X受体α（retinoid X receptorα，RXRα）/过氧化物酶体增殖物激活受体α（peroxisome proliferator-activated receptorα，PPARα）等。肝富集转录因子能结合HBV基因组中的4个启动子,从而调控HBV的基因转录[6]。其中，HNF4α和RXR/PPAR与Cp激活密切相关。我们研究团队前期研究证实HNF4α和RXR/PPAR通过与HBV C启动子区近端结合后激活C启动子，进而调控HBV3.5 kb前基因组RNA的转录和病毒复制[7]。由于HBx反式激活HBV Cp在其增强HBV复制中也发挥重要作用，而HNF4α和RXR/PPAR是调控HBV C启动子活性的重要因素，那么作为协同因子，HBx反式激活HBV Cp从而增强HBV复制的作用是否"基于HNF4α和RXR/PPAR结合HBV Cp来实现"值得进一步研究。
