构建人ABO血型A101、B101及其CisAB01、Ael05、B(A)04和Bw03亚型真核表达载体，为研究ABO血型基因及亚型基因的功能奠定基础。
从已知ABO基因分型的标本中(A101, B101)提取总RNA，将其逆转录合成cDNA，经特异性引物扩增目的基因片段，将其定向连接到pcDNA3.1(＋)真核表达载体；采用定点突变PCR的方法构建CisAB01、Ael05、B(A)04和Bw03亚型真核表达载体，通过测序鉴定其序列正确。将ABO血型A101、B101及其CisAB01、Ael05、B(A)04和Bw03亚型真核表达载体分别转染Hela细胞系，通过免疫荧光和Western印迹检测各ABO基因在细胞中的表达。
测序结果显示扩增到的A101及B101 cDNA以正确序列和方式插入载体，CisAB01、Ael05、B(A)04和Bw03亚型真核表达载体的测序结果显示相应位点均成功突变；免疫荧光和Western印迹结果显示A101、B101及其CisAB01、Ael05、B(A)04和Bw03亚型在Hela细胞中均有表达。
成功构建了ABO血型基因及亚型基因真核表达载体，体外转染Hela细胞成功表达糖基转移酶，为后续研究奠定了基础。
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ABO血型基因位于染色体9q34.1～9q34.2区，编码糖基转移酶，A型人携带A基因编码α-1, 3-N-乙酰氨基半乳糖转移酶，能够将N-乙酰氨基半乳糖加在H抗原岩藻糖末端产生A抗原。B型人携带B基因编码α- 1, 3-半乳糖基转移酶，能将半乳糖加在H抗原岩藻糖末端产生B抗原。而O基因与A基因相比只是cDNA上的第6外显子nt261缺失了一个胞嘧啶，造成了O基因在261位后发生阅读框的移动，形成终止密码子，提前终止了转移酶的翻译，未形成催化功能区。除A、B、AB、O型之外，还有抗原表达弱或者复合型糖基转移酶基因(既有A酶催化功能也有B酶催化功能)等亚型的广泛存在。研究ABO亚型有血清学(免疫血液学实验)、基因水平(DNA、mRNA)、蛋白水平(氨基端、糖基转移酶、蛋白构象)3种模式。目前对于变异ABO基因编码的糖基转移酶功能研究较少。本研究中我们将A101、B101的基因以及本实验室近年来在青岛地区发现的最多的亚型基因CisAB01、Ael05、B(A)04和Bw03进行真核表达载体的构建[1,2,3]，再通过免疫荧光和Western印迹对转入基因的表达产物进行鉴定，为后续的糖基转移酶的研究奠定基础。
