探讨夫妇ABO血型不合O型血孕妇免疫球蛋白(Ig)G抗A/B效价与新生儿溶血病(HDN)的相关性。
选择2015年2月至2017年8月，于山东省血液中心血型参比研究室进行夫妇ABO血型不合产前血型抗体检查的104例O型Rh阳性血型孕妇为研究对象。孕妇年龄为(26.5±6.8)岁。根据孕妇的孕次，将其分为3组：首次妊娠组(n＝31)，2次妊娠组(n＝35)，≥3次妊娠组(n＝38)。采用微柱凝胶法检测孕妇及其丈夫的ABO血型、孕妇的Rh血型及血清IgG抗A/B效价。对新生儿脐静脉血标本进行HDN 3项试验，包括红细胞直接抗人球蛋白试验、血清游离抗体试验和红细胞抗体释放试验。根据以上检测结果，分别计算孕妇血清IgG抗A/B阳性率和新生儿ABO-HDN发生率，并且分析孕妇孕次、血清IgG抗A/B效价、新生儿ABO-HDN发生率的相关性。采用方差分析比较3组孕妇的年龄、孕龄等的总体差异。采用χ2检验对3组孕妇血清IgG抗A/B阳性率，母体不同血清IgG抗A/B阳性率的新生儿ABO-HDN发生率进行比较。以上资料进一步两两比较，采用Bonferroni法调整检验水准。采用Spearman轶相关分析孕妇的孕次、血清IgG抗A/B效价、新生儿ABO-HDN发生率3者的相关性。本研究遵循的程序符合山东省血液中心医学伦理委员会制定的标准，经过该伦理委员会批准(批准文号：鲁血伦审字[2019]5号)，并与所有受试者及其监护人签署临床研究知情同意书。
①本研究104例孕妇的ABO血型均为O型，Rh血型均为Rh阳性。其丈夫的ABO血型包括，A型41例、B型48例和AB型15例。新生儿的ABO血型包括，A型45例，B型50例，O型9例。②本研究104例孕妇的血清中，IgG抗A/B总阳性率为65.4%(68/104)。初次、2次、≥3次妊娠组孕妇血清IgG抗A/B阳性率分别为45.2%(14/31)、65.7%(23/35)、81.6%(31/38)，3组比较，总体差异有统计学意义(χ2＝10.007，P＝0.008)。其中，≥3次妊娠组孕妇血清IgG抗A/B阳性率最高，与首次妊娠组比较，差异有统计学意义(χ2＝9.981，P＝0.002)，与2次妊娠组比较，差异无统计学意义(χ2＝2.382，P＝0.123)。③本研究104例新生儿中，ABO-HDN发生率为17.3%(18/104)。母体血清IgG抗A/B效价<64、＝64、＝128、≥256的新生儿ABO-HDN发生率分别为5.6%(2/36)、9.5%(2/21)、25.0%(5/20)和33.3%(9/27)，4者比较，总体差异有统计学意义(χ2＝10.345，P＝0.018)。其中，母体血清IgG抗A/B效价≥256的新生儿ABO-HDN发生率最高，与母体血清IgG抗A/B效价<64的新生儿比较，差异有统计学意义(χ2＝8.261，P＝0.004)，与母体血清IgG抗A/B效价＝64、128的新生儿分别比较，差异均无统计学意义(P>0.05)。④本研究104例孕妇的孕次与其血清IgG抗A/B效价，与新生儿的ABO-HDN发生率；母体血清IgG抗A/B效价与新生儿的ABO-HDN发生率，均呈正相关关系(r＝0.423、P＝0.035, r＝0.491、P＝0.021, r＝0.491、P＝0.021)。
夫妇ABO血型不合O型血多次妊娠孕妇的血清IgG抗A/B效价阳性率升高，新生儿发生ABO-HDN的风险较大。
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新生儿溶血病(hemolytic disease of newborn，HDN)是由于母婴血型不合，母体产生的免疫球蛋白(immunoglobulin，Ig)G抗体进入胎儿血液循环引起的同种免疫排斥反应，临床以新生儿溶血为主要表现，同时可引起黄疸，肝、脾大等，严重时可致新生儿死亡[1]。ABO血型不合是最常见的HDN致病因素[2]。有研究结果显示，母体IgG抗A/B效价与HDN的发生、发展密切相关，而夫妇ABO血型不合O型血孕妇的孕次越多，其体内的血清IgG抗体效价越高[3,4,5]。本研究拟对不同孕次孕妇血清IgG抗A/B效价及新生儿HDN三项试验进行检测，分析孕妇的孕次、血清IgG A/B抗体效价、新生儿的ABO-HDN发生率三者之间的关系，旨在为临床医师对HDN的诊断与治疗提供参考依据。现将研究结果报道如下。
选择2015年2月至2017年8月于山东省血液中心血型参比研究室进行夫妇ABO血型不合产前血型抗体检查的104例O型Rh阳性血型孕妇为研究对象。孕妇年龄为(26.5±6.8)岁。研究对象纳入标准：①孕妇血型为O型Rh阳性，其丈夫血型为A、B或AB型；②孕妇产前检查结果无显著异常，新生儿均为足月、单胎、顺产分娩；③孕妇年龄为22～40岁。排除标准：①合并血液系统疾病，免疫系统疾病，肝、肾功能不全者；②合并妊娠期高血压等妊娠合并症者；③既往有输血史者；④不愿意参与本试验者。根据孕妇的孕次不同，将其分为3组：首次妊娠组(n＝31)，2次妊娠组(n＝35)，≥3次妊娠组(n＝38)。3组孕妇年龄、妊娠周期、孕妇丈夫的ABO血型构成比等基线资料比较，差异均无统计学意义(P>0.05)，3组孕妇具有可比性。3组孕妇的基线资料比较，见表1。本研究遵循的程序符合山东省血液中心医学伦理委员会制定的标准，经过该伦理委员会批准(批准文号：鲁血伦审字[2019]5号)，并与所有受试者签署临床研究知情同意书。
3组孕妇的一般临床资料比较
3组孕妇的一般临床资料比较
| 组别 | 例数 | 年龄(岁， ±s) | 孕龄(孕周， ±s) | 丈夫ABO血型构成比[(例数)%] | ||
|---|---|---|---|---|---|---|
| A型 | B型 | AB型 | ||||
| 首次妊娠组 | 31 | 29.8±5.6 | 38.0±2.6 | 12(38.7) | 15(48.4) | 4(12.9) |
| 2次妊娠组 | 35 | 29.0±6.9 | 37.5±3.3 | 14(40.0) | 16(45.7) | 5(14.3) |
| ≥3次妊娠组 | 38 | 30.3±5.0 | 37.2±2.8 | 15(39.5) | 17(44.7) | 6(15.8) |
| χ2/F值 | 0.404 | 0.651 | 0.158 | |||
| P值 | 0.669 | 0.523 | 0.997 | |||
ABO血型定型试剂(批号：201606014，上海血液生物技术有限公司)，抗D试剂(批号：20160703，荷兰三昆公司)，IgG抗体试剂盒(批号：20160801，上海纪宁实业有限公司)。IH-500全自动血型分析仪卡式微柱凝胶检测系统(美国伯乐公司)，KA-2200型血清学离心机(日本久保田公司)，MC450型红细胞自动洗涤离心机(日本日立公司)。
于孕妇16孕周时，采集其清晨空腹静脉血3 mL，同时采集其丈夫空腹静脉血2 mL。新生儿娩出后立即采集脐静脉血2 mL。采用微柱凝胶法检测孕妇及其丈夫ABO血型、孕妇Rh血型，以及孕妇血清IgG抗A/B效价。对新生儿脐静脉血标本进行HDN三项试验检测，包括微柱凝胶法红细胞直接抗人球蛋白试验、血清游离抗体试验和红细胞抗体释放试验。以上试验操作严格按照《全国临床检验操作规程》及相应的试剂及仪器说明书进行。微柱凝胶法红细胞直接抗人球蛋白试验中，若肉眼观察到红细胞沉积于微胶柱底部，则判断该试验检测结果呈阴性；若分布于微胶柱中或停留在微胶柱上方，则判断检测结果呈阳性。IgG抗体效价检验中，IgG抗A/B效价≥64，则提示IgG抗A/B表达呈阳性[6]。
ABO-HDN的诊断标准如下。①母亲和新生儿ABO血型不一致；② HDN三项试验检测结果均呈阳性，或红细胞直接抗人球蛋白试验和红细胞抗体释放试验中任意一项检测结果呈阳性，并且血清胆红素值≥120 mg/L[7]。
本研究所得数据采用SPSS22.0统计学软件包进行统计学分析。孕妇的年龄、孕周等呈正态分布且方差齐的计量资料，采用
±s表示，3组比较采用方差分析。孕妇丈夫的ABO血型构成比、孕妇IgG抗A/B阳性率等计数资料，采用百分数(%)表示，3组总体和组间两两比较，采用χ2检验。上述资料进一步两两比较，采用Bonferroni法调整检验水平。采用Spearman轶相关分析孕妇的孕次、血清IgG抗体效价、新生儿ABO-HDN发病率三者的关系。本研究的统计学检验均采用双侧检验，以P<0.05表示差异有统计学意义。
本研究104例孕妇的ABO血型均为O型，Rh血型均为Rh阳性。其丈夫ABO血型包括，A型41例、B型48例和AB型15例。新生儿ABO血型包括，A型45例，B型50例，O型9例。
本研究104例夫妇ABO血型不合O型血孕妇的血清中，共检出IgG抗A/B阳性者68例，IgG抗A/B总阳性率为65.4%(68/104)。初次、2次、3次及以上妊娠组孕妇血清IgG抗A/B阳性率分别为45.2%(14/31)、65.7%(23/35)、81.6%(31/38)，3组比较，总体差异有统计学意义(χ2＝10.007，P＝0.008)。其中，≥3次妊娠组孕妇血清IgG抗A/B阳性率最高，其与首次妊娠组比较，差异有统计学意义(χ2＝9.981，P＝0.002)，与2次妊娠组比较，差异无统计学意义(χ2＝2.382，P＝0.123)。本研究3组孕妇血清IgG抗A/B阳性率分布，见表2。
3组孕妇血清IgG抗A/B阳性率[例数(%)]
3组孕妇血清IgG抗A/B阳性率[例数(%)]
| 组别 | 例数 | 孕妇血清IgG抗A/B效价 | ||
|---|---|---|---|---|
| 64 | 128 | ≥256 | ||
| 首次妊娠组 | 31 | 8(25.8) | 4(12.9) | 2(6.5) |
| 2次妊娠组 | 35 | 8(22.9) | 8(22.9) | 7(20.0) |
| ≥3次妊娠组 | 38 | 5(13.2) | 8(21.0) | 18(47.4) |
| 合计 | 104 | 21(20.2) | 20(19.2) | 27(26.0) |
注：Ig为免疫球蛋白
本研究104例新生儿中，ABO-HDN发生率为17.3%(18/104)。母体血清IgG抗A/B效价<64、＝64、＝128、≥256新生儿的ABO-HDN发生率分别5.6%(2/36)、9.5%(2/21)、25.0%(5/20)和33.3%(9/27)，四者比较，总体差异有统计学意义(χ2＝10.345，P＝0.018)。其中，母体IgG抗A/B效价≥256新生儿的ABO-HDN发生率最高，其与母体IgG抗A/B效价<64新生儿比较，差异有统计学意义(χ2＝8.261，P＝0.004)，与母体IgG抗A/B效价＝64、128新生儿分别比较，差异均无统计学意义(χ2＝3.791，P＝0.052；χ2＝0.382，P＝0.537)。不同母体血清IgG抗A/B效价新生儿的ABO-HDN发生率比较，见表3。
不同母体血清IgG抗A/B效价新生儿的ABO-HDN发生率比较[例数(%)]
不同母体血清IgG抗A/B效价新生儿的ABO-HDN发生率比较[例数(%)]
| 母体血清IgG抗A/B效价 | 例数 | ABO-HDN发生率 |
|---|---|---|
| <64 | 36 | 2(5.6) |
| 64 | 21 | 2(9.5) |
| 128 | 20 | 5(25.0) |
| ≥256 | 27 | 9(33.3) |
| χ2值 | 10.345 | |
| P值 | 0.018 |
注：Ig为免疫球蛋白，HDN为新生儿浓血病
本研究104例孕妇的孕次与其IgG抗A/B效价呈正相关关系(r＝0.423，P＝0.035)，与新生儿的ABO-HDN发生率亦呈正相关关系(r＝0.473，P＝0.031)。孕妇血清IgG抗A/B效价与新生儿的ABO-HDN发生率呈正相关关系(r＝0.491，P＝0.021)。
HDN是发生在胎儿期或早期新生儿的一种免疫性溶血性综合征，主要发病机制为：当胎儿的血型与母亲的血型不合时，胎儿的红细胞进入母亲体内可使母亲体内产生抗胎儿红细胞的血型抗体，抗体通过胎盘进入胎儿体内，则可引起胎儿红细胞被破坏，从而引发溶血。新生儿HDN主要由母婴ABO血型不合所致[8]，其中99%发生于父母ABO血型不合[9]。本研究104例孕妇与其丈夫的ABO血型不合，孕妇ABO血型均为O型，丈夫以B型居多，AB型最少见。胎儿遗传自父亲的血型抗原进入母体，引起免疫反应，从而导致母体产生IgG类抗体(IgG抗A/B)。IgG类抗体是唯一可以通过胎盘进入胎儿血液循环的抗体，妊娠14周时即可在胎儿体内发现IgG类抗体低水平表达[10,11]。妊娠早期IgG类抗体通过被动扩散方式转运至胎儿体内，随着妊娠周期的增加转为主动转运，胎儿血液循环中IgG类抗体水平逐渐增高，与胎儿红细胞血型抗原产生抗原-抗体反应，被IgG类抗体致敏的胎儿红细胞在分娩前、后加速破坏，导致胎儿红细胞与IgG类抗体发生的免疫性溶血反应[12]。
本研究结果显示，104例夫妇ABO血型不合O型血孕妇的血清中，共检出IgG抗A/B阳性68例，总阳性率为65.4%(68/104)。初次、2次、3次及以上妊娠组孕妇血清IgG抗A/B阳性率比较，总体差异有统计学意义(P<0.05)。其中，3次及以上妊娠组孕妇血清IgG抗A/B阳性率最高。由此推测，孕妇孕次越多，孕妇血清IgG抗A/B阳性率越高。其可能的机制为：多次妊娠增加了胎盘绒毛膜受损的程度，胎儿红细胞抗原通过胎盘绒毛膜进入母体增多，刺激母体记忆B细胞产生更多、更高效价的IgG抗体。其次，孕次越多的孕妇，通常年龄越大，胎盘细胞膜特异性蛋白质受体选择转运系统越成熟，胎儿体内IgG抗体效价越高[13]。马春娅等[14]研究发现，当母体IgG抗体效价>64时，新生儿存在罹患HDN的风险，母体IgG抗体效价>64被认为对诊断HDN有临床意义；当母体IgG抗体>256或持续升高超过正常值参考值4倍时，可判定胎儿发生HDN的可能性较大。
本研究中104例新生儿的ABO-HDN发病率为17.3%(18/104)。母体IgG抗A/B效价<64、＝64、＝128、≥256新生儿的ABO-HDN发生率比较，总体差异有统计学意义(P<0.05)。其中，母体IgG抗A/B效价≥256新生儿的ABO-HDN发生率最高。这说明，孕妇的孕次增多，可能会通过提高血清IgG抗A/B效价，导致新生儿的ABO-HDN发生率升高。本研究相关性分析结果显示，孕妇孕次与血清IgG抗A/B效价呈正相关关系(P<0.05)。并且在不同孕次分组孕妇中，3次及以上妊娠组孕妇血清IgG抗A/B阳性率最高。此外，新生儿的ABO-HDN发生率与母体血清IgG抗A/B效价亦存在正相关关系(P<0.05)。这说明，随着母体IgG抗A/B效价的增高，新生儿的ABO-HDN发生率增高。随着孕妇孕次的增加，孕妇血清IgG抗A/B阳性率升高，效价亦升高，导致新生儿的ABO-HDN发生率提高。即孕妇孕次与其新生儿的ABO-HDN发生率的相关性，与IgG抗体的中介效应有关。李东晖等[15]研究亦显示，孕妇的血清IgG抗A/B效价、新生儿ABO-HDN发生率，随着孕次的增多而升高。邱芬等[16]研究认为，对O型血孕妇进行动态监测血清lgG抗A/B效价，对于高效价孕妇进行及早干预，有助于降低新生儿的ABO-HDN发病率。
综上所述，夫妇ABO血型不合O型血孕妇多次妊娠者的血清IgG抗A/B效价升高，增加新生儿ABO-HDN的患病风险。因此，定期对O型血孕妇进行IgG抗体效价的检测，对预防和降低新生儿ABO-HDN发生，提高出生人口素质有益。
所有作者均声明不存在利益冲突
