实验研究
富血小板血浆在兔外伤性视神经损伤中的修复作用及其机制
中华实验眼科杂志, 2021,39(3) : 198-206. DOI: 10.3760/cma.j.cn115989-20200701-00468
摘要
目的

研究自体富血小板血浆(PRP)对兔外伤性视神经损伤及视网膜的修复作用及机制。

方法

选取清洁级成年新西兰白兔40只,构建兔右眼视神经钳夹损伤模型,将造模成功的36只新西兰白兔按照随机数表法随机分为模型对照组、生理盐水对照组和PRP组,每组12只,均以右眼为实验眼,另取12只健康未造模兔作为正常对照组。抽取兔自体血制备PRP,造模后每隔1 d分别在PRP组和生理盐水组实验眼球后近视神经损伤处注射20 μl PRP和相同体积的生理盐水,共注射10次。正常对照组实验兔不做注射干预。分别在造模后30 d和60 d过量麻醉法处死各组3只实验兔,摘取右侧眼球和视神经,采用组织病理学方法观察视网膜和视神经的形态学变化,并计算视网膜神经节细胞(RGCs)密度、视网膜神经纤维层(RNFL)厚度变化;采用免疫组织化学染色法比较凋亡蛋白家族caspase-3、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)的表达;采用实时荧光定量PCR和Western blot法检测视神经和视网膜脑源性神经生长因子(BDNF)和生长相关蛋白43(Gap-43)的mRNA和蛋白表达。

结果

PRP组造模后30 d和60 d时RNFL厚度值分别为(6.60±1.16)和(6.89±1.21)μm,均大于模型对照组相应时间点的(4.80±0.43)和(2.18±0.23)μm,差异均有统计学意义(均P<0.05)。PRP组造模后30 d和60 d时RGCs数量分别为(13.00±1.00)/视野和(20.00±2.65)/视野,均多于模型对照组相应时间点的(6.33±0.58)和(10.33±1.53)/视野,差异均有统计学意义(均P<0.05)。PRP组造模后60 d时的RGCs数量较造模后30 d时显著增加,差异有统计学意义(P<0.05);造模后30 d和60 d,生理盐水组、模型对照组视网膜caspase-3蛋白阳性表达A值均明显高于正常对照组和PRP组,PRP组Bcl-2蛋白阳性表达A值均较模型对照组和生理盐水组明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。PRP组视网膜和视神经中BDNF和Gap-43的mRNA水平和蛋白含量均较模型对照组有不同程度增高,PRP组造模后60 d时各组织中BDNF和Gap-43的mRNA和蛋白相对表达量均较造模后30 d时水平有所降低,差异均有统计学意义(均P<0.05)。

结论

PRP可有效抑制视神经损伤后RGCs的凋亡及视网膜的继发性损伤,促进RGCs抗凋亡作用,从而减缓外伤性视神经病变后的视网膜和视神经损伤,同时通过上调神经生长因子的表达促进视神经和视网膜的修复。

引用本文: 李琳玲, 邢怡桥. 富血小板血浆在兔外伤性视神经损伤中的修复作用及其机制 [J] . 中华实验眼科杂志, 2021, 39(3) : 198-206. DOI: 10.3760/cma.j.cn115989-20200701-00468.
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外伤性视神经病变(traumatic optic neuropathies,TON)是由于外伤直接或间接导致的视神经损伤,是颅脑损伤后视力永久性丧失的主要原因之一[1]。寻求视神经损伤后视神经和视网膜修复再生的方法、探索改善视神经功能的治疗策略是眼科研究的热点[2]。富血小板血浆(platelet-rich plasma,PRP)是全血经过离心分离而得到的血液制品,含有多种生长因子,如血小板衍生生长因子、表皮生长因子、胰岛素样生长因子-1、血管内皮生长因子等,在肌肉和骨骼等多种组织的损伤修复和再生过程中起重要作用[3]。此外,PRP可作为组织工程应用的自体来源,作为骨髓干细胞颅内给药的支架,可显著改善诱导性脑出血实验动物的神经功能[4]。随着PRP在临床的应用越来越广泛,也有研究发现PRP可改善接受体外人工受孕治疗患者的子宫内膜厚度,从而实现对子宫内膜生长不良导致不孕症的治疗[5]。然而,PRP对视神经损伤修复作用的研究较少。目前常用的视神经损伤动物模型主要有视神经横断伤、视神经撞击伤、视神经牵拉伤、视神经挤压伤、视神经钳夹伤等动物模型。视神经横断伤动物模型可造成所有视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGCs)轴突完全切断[6]。视神经撞击伤动物模型接近临床的间接视神经损伤,但是致伤设备复杂、操作繁琐、对实验动物创伤较大,死亡率高[7]。视神经牵拉伤动物模型致伤装置复杂、手术步骤较多且操作难度较大[8]。视神经挤压伤动物模型手术操作简单,但难以保证造成损伤程度均一[9]。视神经钳夹伤模型是目前实验研究中应用最广泛的方法,具有设计简单、易于操作、创伤性小、造模成功率高,且能够保证视神经髓鞘的完整性等特点[10,11]。本研究观察兔视神经钳夹伤模型中视网膜和视神经受损情况,并探索PRP对视神经损伤的修复作用及其机制。

 
 
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